CfDNA и CTC совместно контролируют клиническое применение лечения рака легких

1. Имея биологическую лабораторию и лабораторию PCR 2. Проект по циркулирующим опухолевым клеткам (КТК) 3. Имея опытных, опытных и квалифицированных техников, имеющих квалификацию для вводного инструктажа 1 Прогнозная модель для оценки терапевтической эффективности двух методов тестирования CTC и cfDNA для пациентов с раком легких в разных стадиях 2 Установить стандартизированные процессы тестирования и стандарты интерпретации результатов. Оценка ценности двух методов тестирования для индивидуального и совместного мониторинга лечения рака легких с помощью CTC и cfDNA - тестов 1) Изучение корреляции CTC и cfDNA - тестов с терапевтической эффективностью лечения рака легких, построение прогностической модели 2) Опубликовано 1 - 2 статьи SCI. Последующие результаты служат основой для дальнейшего декларирования темы. Обнаружение фрагментов клеточной свободной ДНК (cfDNA) является новой и быстро развивающейся технологией « жидкой биопсии» в последние годы. Исследование показало, что у пациентов с раком наблюдалось аномальное увеличение cfDNA в плазме крови и сыворотке крови [1], предполагая, что cfDNA коррелирует с опухолью и может стать биомаркером для оценки прогнозов и мониторинга эффективности лечения [2]. До сих пор, в колоректальном раке, раке поджелудочной железы, раке легких и других опухолях, было обнаружено, что cfDNA имеет характерные генетические изменения, включая точечные мутации, нестабильность микроспутников, гиперметилирование ДНК, отсутствие гетероидов и так далее [3]. Многочисленные исследования показывают, что генетические изменения в cfDNA очень согласуются с генетическими изменениями в первичных опухолях и циркулирующих опухолевых клетках (CTC) [4,5]. Тестирование CTC или циркулирующих фрагментов ДНК опухолевых клеток (ctDNA), которые могут быть свободны от клеток (cfDNA), является новой и быстро развивающейся технологией « жидкой биопсии» в последние годы. Исследование показало, что у пациентов с раком наблюдалось аномальное увеличение cfDNA в плазме крови и сыворотке крови [1], предполагая, что cfDNA коррелирует с опухолью и может стать биомаркером для оценки прогнозов и мониторинга эффективности лечения [2]. До сих пор, в колоректальном раке, раке поджелудочной железы, раке легких и других опухолях, было обнаружено, что cfDNA имеет характерные генетические изменения, включая точечные мутации, нестабильность микроспутников, гиперметилирование ДНК, отсутствие гетероидов и так далее [3]. Многочисленные исследования показывают, что генетические изменения в cfDNA очень согласуются с генетическими изменениями в первичных опухолях и циркулирующих опухолевых клетках (CTC) [4,5]. CTC или циркулирующая опухолевая клеточная ДНК (ctDNA) может использоваться в качестве нового биомаркера для диагностики, лечения и предварительной оценки опухоли [6], но имеет более низкое содержание в периферической крови пациента, его нелегко извлечь и идентифицировать, что ограничивает его практическое применение во временной постели из - за его сложной работы, высокой стоимости и длительного цикла мониторинга [7]. Предварительные данные показывают, что cfDNA имеет сильную положительную корреляцию с содержанием ctDNA [8]. Таким образом, мы можем косвенно контролировать реакцию опухоли на лечение, проверяя уровень cfDNA. Кроме того, нормальная ткань или клетка также умирает или некроз после облучения, высвобождая большое количество cfDNA в течение короткого периода времени, и количество изменений может указывать на риск радиационного повреждения [9]. Высокая чувствительность, точное, быстрое, удобное и эффективное обнаружение изменений содержания cfDNA в крови является ключом к разработке этого клинического применения « жидкой биопсии», и наше совместное исследовательское подразделение разработало набор методов усиления сигналов нуклеиновой кислоты (SuperbDNATM), которые косвенно отражают общий уровень cfDNA, обнаруживая содержание свободных последовательностей Alu в крови. Последовательность Алу представляет собой массивно выраженную повторяющуюся последовательность, которая составляет около 10% генома [10] и стабильно присутствует во всей крови [11], экспрессия которой имеет сильную корреляцию с уровнем общей cfDNA [12]. Эта технологическая платформа, используемая для количественной оценки cfDNA с чувствительностью 91,7% и специфичностью 88,6% [13,14], получила глобальный патент США (патент US2012 / 0003625A1). Эта техническая платформа характеризуется использованием модифицированных молекул BranchedDNA (bDNA) и новых наборов зондов для улучшения амплификации маркировочных химических сигналов на последовательности ДНК - мишени без увеличения самой последовательности - мишени (как показано на рисунке 1). Принцип работы заключается в том, что каждая группа олигонуклеотидных зондов содержит два типа синтетических зондов, а именно захватывающий удлинитель (CES) и маркировочный удлинитель (LES). Как CES, так и LES могут связываться с последовательностью ДНК - мишени. Во - первых, MagPlex ™ Взаимосвязанные зонды захвата Microspheres (магнитные шарики) захватывают последовательность ДНК - мишени путем общего скрещивания между зондом захвата CES и ДНК - мишенью CES. Затем LES может связываться как с ДНК - мишенью, так и с предварительно расширенным зондом. Один зонд предварительного расширения содержит 20 точек, связанных с зондом расширения, а один зонд расширения также содержит 20 точек, связанных с зондом маркировки. Таким образом, целевой сигнал в конечном итоге был увеличен в 400 раз. Наконец, биометрический маркер в сочетании со стрептомицином (SAPE), маркированным водорослями, измеряет интенсивность флуоресценции на магнитных шариках с помощью приборов Luminex, таких как MAGPIX. Интенсивность флуоресценции пропорциональна количеству молекул ДНК, присутствующих в образце, что позволяет рассчитать уровень cfDNA в образце. Этот метод обеспечивает высокочувствительное количественное обнаружение концентрации cfDNA в образцах плазмы крови, преимущества включают в себя отсутствие необходимости извлечения, отсутствие необходимости расширения, простота в эксплуатации, короткий цикл тестирования, подходящий для клинических испытаний. По сравнению с другими учеными, такими как Canales, SuperbDNATM продемонстрировал некоторые преимущества при тестировании 244 распространенных генов, таких как меньшее отклонение, чтобы избежать ошибок, связанных с потерей и расширением извлечения ДНК, и избежать перекрестного загрязнения образцов, которые легко автоматизировать и обнаружить в больших количествах [15]. Эта технология обеспечивает необходимую техническую поддержку для мониторинга изменений cfDNA во время лечения опухолей.